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發(fā)布日期:2022-05-30 點(diǎn)擊率:115
PCR儀是利用升溫使DNA變性,用限制性內(nèi)切酶使DNA雙鏈解鏈,在聚合酶的作用下使單鏈復(fù)制成雙鏈,進(jìn)而達(dá)到基因復(fù)制的目的。
PCR的分類
根據(jù)DNA擴(kuò)增的目的和檢測(cè)的標(biāo)準(zhǔn)可以將PCR儀分為:普通PCR儀,梯度PCR儀,原位PCR,實(shí)時(shí)熒光定量PCR儀等幾類。
1、普通PCR儀
一般把一次PCR擴(kuò)增只能運(yùn)行一個(gè)特定退火溫度的PCR儀,稱之為普通PCR儀,也就是傳統(tǒng)的PCR儀。如果要用它做不同的退火溫度則需要多次運(yùn)行。普通PCR儀主要應(yīng)用于科研、教學(xué)、臨床醫(yī)學(xué)、檢驗(yàn)、檢疫等。
2、梯度PCR儀
一次性PCR擴(kuò)增可設(shè)置一系列不同的退火溫度條件的稱之為梯度PCR儀。不同的DNA片段其適合的退火溫度不同,通過設(shè)置一系列的梯度退火溫度進(jìn)行擴(kuò)增,從而一次性PCR擴(kuò)增就可以篩選出表達(dá)量高的適合退火溫度進(jìn)行有效的擴(kuò)增。
梯度PCR儀主要用于研究未知DNA退火溫度的擴(kuò)增,這樣既節(jié)約時(shí)間,也節(jié)約成本。在不設(shè)置梯度的情況下亦可當(dāng)做普通的PCR用,多應(yīng)用于科研、教學(xué)機(jī)構(gòu),檢驗(yàn)、檢疫等。
3、原位PCR儀
原位PCR是保持細(xì)胞或組織的完整性,使PCR反應(yīng)體系滲透到組織和細(xì)胞中,在細(xì)胞的靶DNA所在的位置上進(jìn)行基因擴(kuò)增。不但可以檢測(cè)到靶DNA,而且還可以了解靶DNA存在于何種細(xì)胞中,更有利于探討靶DNA與細(xì)胞之間的關(guān)系。
原位PCR儀主要應(yīng)用于:檢測(cè)外源性基因片段,提高檢出率,集中在病毒感染的檢查上;觀察病原體在體內(nèi)分布規(guī)律、內(nèi)源性基因片段;檢測(cè)導(dǎo)入基因;遺傳病基因檢測(cè)。
4、實(shí)時(shí)熒光定量PCR儀
在普通PCR儀設(shè)計(jì)基礎(chǔ)上增加熒光信號(hào)采集系統(tǒng)和計(jì)算機(jī)分析處理系統(tǒng),形成了具有熒光定量功能的PCR儀器。在PCR擴(kuò)增時(shí)加入的引物是利用同位素、熒光素等進(jìn)行標(biāo)記,使用引物和熒光探針同時(shí)與模板特異性結(jié)合擴(kuò)增。擴(kuò)增的結(jié)果通過熒光信號(hào)采集系統(tǒng)實(shí)時(shí)采集信號(hào)連接輸送到計(jì)算機(jī)分析處理系統(tǒng),得出量化的實(shí)時(shí)結(jié)果輸出。
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